[일본약전]스테아린산 마그네슘-스테아린산・팔미트산 함량비(GC시험)

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원료명 : 스테아린산 마그네슘

시험규격 : 일본약전(JP17)

시험명 : 스테아린산・팔미트산 함량비

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1)규격・시험법 확인

JP17의 스테아린산 마그네슘 규격, 스테아린산・팔미트산 함량비

 

 

해석하면

 

 스테아린산・팔미트산 함량비 본품 0.10g을 환류냉각기를 부착한 작은 코니컬 플라스크에 덜어낸다. 삼불화붕소・메탄올시액 5.0mL를 가하여 흔들어 섞고, 녹을때까지 약 10분간 가열한다. 냉각기에 위에서부터 헵탄 4mL를 가하여 10분간 가열한다. 냉각후 염화나트륨포화용액 20mL를 더한후 흔들어 섞은후 방치하여 액을 두층으로 분리시킨다. 분리한 헵탄층을 헵탄으로 한번 씻어낸 약 0.1g의 무수황산나트륨을 통하여 다른 플라스크에 덜어낸다. 이 액 1.0mL을 10mL의 메스플라스크에 덜어서 헵탄으로 10mL로 메스업하여 시료용액으로 한다. 시료용액 1μl에 대해 다음 조건에서 가스크로마토그래피<2.02>의 시험법에 따라 시험을 행한다. 시료용액의 스테아린산메틸의 피크면적인A와 모든 지방산에스테르의 피크의합계면적인B를 측정하여, 본품의 지방산분가중의 스테아린산의 비율(%)을 다음식에 따라서 계산한다.

 

스테아린산의 비율(%) = A/B X 100

 

같은 방법으로, 본품중에 포함된 팔미트산의 비율(%)을 계산한다. 스테아린산메틸의 피크면적과 스테아린산메틸과 팔미트산메틸의 피크의 합계면적은, 모든 지방산에스테르의 피크의 합계면적의 각각 40%이상, 그리고 90%이상이다.

(스테아린산메틸 피크면적 40%이상, 스테아린산메틸 피크면적+팔미트산메틸 피크면적 90%이상)

 

시험조건

 검출기 : 수소염이온화검출기(FID)

 컬럼 : 내경 0.32mm, 길이 30m의 퓨즈드 실리카겔관의 내면에 두께 0.5μm로 가스크로마토그래피용 폴리에틸렌글리콜 15000- 디에폭시드를 피복한 것.

 컬럼온도 : 주입후 2분간 70℃를 유지, 그 후, 매분 5℃로 240℃까지 승온하여 5분간 유지한다.

 주입구온도 : 220℃부근의 일정온도

 검출기온도 : 260℃부근의 일정온도

 캐리어 가스 : 헬륨

 유량 : 매분 2.4mL

 스플릿비 : 스플릿리스

 면적측정범위 : 용매피크의 뒤로 41분까지

 

 시스템적합성

  검출의 확인 : 가스크로마토그래피용 스테아린산과 가스크로마토그래피용 팔미트산을 각각 약 50mg을, 환류냉각기를 부착할수있는 작은 코니컬플라스크에 칭량한다. 삼불화붕소・메탄올시액 5.0mL를 가하여 흔들어섞고, 그후에는 시료용액과 같은 방법으로 조작하여 시스템적합성시험용액으로 한다. 시스템적합성시험용액 1mL을 정확하게 취해 헵탄을 더해 정확히 10mL로 한다. 이 액 1mL를 정확하게 취해 헵탄을 더해 정확히 10mL로 한다. 마지막으로 이 액1mL를 정확히 취하여 헵탄을 이용하여 정확히 10mL로 한다. 이 액 1μl에서 얻은 스테아린산메틸의 피크면적이 시스템적합성시험용액의 스테아린산메틸의 피크면적의 0.05~0.15%가 되는것을 확인한다.

 

시스템의성능 : 시스템적합성시험용액1μl에 대해, 상기의 조건에서 조작했을때, 스테아린산메틸에 대한 팔미틴산메틸의 상대유지시간은 약 0.9이며, 그 분리도는 5.0 이상이다.

시스템의재현성 : 시스템적합성시험용액에 대해, 상기의 조건에서 시험을 6회 반복했을때, 팔미트산메틸과 스테아린산메틸의 피크면적의 상태표준편차는 3.0%이하이다. 또한 스테아린산메틸의 피크면적에 대한 팔미틴산메틸의 피크면적의 비의 상태표준편차는 1.0%이하이다.

 

아 길다.

 

2)시험개시

이 시험은 스테아린산마그네슘의 스테아린산과 팔미트산, 지방산의 함량을 확인하는 시험이다.

해당 검체는 분말로, 정전기에 달라붙기 쉬우며 표준품인 스테아린산과 팔미트산은 가스크로마토그래피용으로 나온 표준품을 사용한다.(순도)

 

사용 기구

1.정밀저울(정전기 제거 키트 포함)

2.GC(컬럼등 포함)

3.코니컬플라스크(50mL)

4.환류냉각기

5.수욕

 

사용시약

1.삼불화붕소・메탄올시액

2.헵탄(GC용)

3.염화나트륨포화용액

4.무수황산나트륨

5.스테아린산 표준품

6.팔미트산 표준품

왼쪽부터 삼불화붕소 메탄올시액, 무수황산나트륨, 헵탄, 염화나트륨포화용액

스테아린산 표준품, 팔미트산 표준품

 

위의 기구와 시약이 준비되면 시험 시작

 

①검액, 시스템적합성용액, 검출의확인용액 조제

 (1)코니컬플라스크(50mL) 에 검체 0.10g을 정확히 칭량

 (2)코니컬플라스크(50mL) 에 스테아린산표준품, 팔미트산표준품을 각각 50mg씩 정확히 칭량

왼쪽- 시스템적합성용액용 / 오른쪽 - 검액용

 (3)검액플라스크, 시스템적합성용 플라스크에 삼불화붕소・메탄올시액 5.0mL씩 가한후 혼화

 (4)수욕에서 환류냉각기를 장착한 각 플라스크를 10분간 가열하여 용해(수욕온도 약 40~60도 정도)

환류냉각중

 (5)각 환류냉각기의 위쪽 입구로부터 헵탄 4mL씩 첨가후 10분간 가열후 방냉

 (6)각 플라스크에 염화나트륨포화용액 20mL씩 첨가후 혼합

헵탄층과 물층으로 나뉘어진 각 용액

 (7)큰 시험관으로 이동시킨 후 헵탄층 분리한다

시험관으로 이동시킨 액은 분리하기 쉽다

 (8)미리 준비해둔 0.1g 무수황산나트륨을 분리한 헵탄층에 넣어서 탈수를 시킨다

무수황산나트륨을 넣은 헵탄층

 (9)탈수시킨 헵탄층을 각각 1mL씩 10mL메스플라스크에 각기 넣은후 헵탄으로 10mL 메스업

 (10)검액, 시스템적합성용액 조제 완료

 (11)시스템적합성용액 1mL를 10mL메스플라스크에 넣고 헵탄으로 10mL 메스업

 (12) 위 (11)에서 만든 용액 1mL를 10mL메스플라스크에 넣고 헵탄으로 10mL 메스업

 (13) 위 (12)에서 만든 용액 1mL를 10mL메스플라스크에 넣고 헵탄으로 10mL 메스업

 (14) 위 (13)에서 만든 용액 1mL를 10mL메스플라스크에 넣고 헵탄으로 10mL 메스업(검출의 확인용액)

왼쪽에서부터, 검액, 시스템적합성용액, 검출의확인 희석액

 (15)시험에 사용할 검액등을 바이알에 소분하여 측정준비

GC측정준비

②GC의 조작

 (1)순서에 맞게 GC세팅(라이너,셉텀 결합 인젝터 확인, 워싱바이알 웨이스트 바이알 확인, 제트 결합, 컬럼결합 등)

스플릿리스용 라이너

라이너 결합, 셉텀 교환후 결합

오븐내 컬럼 결합

 (2)가스 확인(헬륨, 수소, 에어 등)

 (3)프로그램 로그인후 프로젝트 작성, 메소드, 시퀀스 작성후 저장

 (4)싱글인젝션으로 피크위치등 시스템적합성 확인

 (5)적합시 본측정 개시

 

3)시험 결과

 

검출의확인용액 - 왼쪽 피크부터 팔미트산메틸, 스테아린산메틸

시스템적합성용액의 피크면적

검액의 피크면적

본시험은 시스템적합성을 만족하며 계산했을때에

스테아린산메틸 피크면적 40%이상, 스테아린산메틸 피크면적+팔미트산메틸 피크면적이 전체 지방산 피크중 90%이상

을 만족해야 적합으로 한다.

 

검체 칭량치 : 0.1009g

스테아린산표준품 칭량 무게 : 0.0500g

팔미트산표준품 칭량 무게 : 0.0503g

 

검출의확인용액에서의 스테아린산메틸피크 면적,

시스템적합성시험용액의 스테아린산메틸피크 면적의 피크면적의 비 : 0.09

팔미트산메틸과 스테아린산메틸의 상대유지시간 : 0.883

팔미트산메틸과 스테아린산메틸의 분리도 : 15.3

팔미트산메틸과 스테아린산메틸의 면적비의 CV : 0.38

 

팔미트산의 비율 : 33.9%

스테아린산 비율 : 62.5%

팔미트산 + 스테아린산 비율 : 96.5%

 

면적비가 규격치에 적합하므로

해당 지방산 시험은 적합으로 판단 한다

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